①原理

高爾基染色包括銀 Golgi 染色和汞 Golgi 染色技術(shù)。

銀 Golgi 染色原理:

浸泡腦組織的重鉻酸鉀溶液與硝酸銀溶液發(fā)生反應(yīng)，生成黑色的鉻酸銀沉淀，由于組織的嗜銀性而沉積于神經(jīng)細(xì)胞中。銀高爾基技術(shù)主要有兩種被廣泛應(yīng)用:快速 Golgi 法和 Golgi- Kopsch 法。

汞 Golgi 染色原理:

由于銀 Golgi染色存在一定缺陷，Cox 對(duì)高爾基技術(shù)進(jìn)行改進(jìn)，被稱(chēng)為「Golgi-Cox 法」。使用重鉻酸鉀和氣化汞的混合物，并加入鉻酸鉀來(lái)調(diào)節(jié)溶液酸性的反應(yīng)。Golgi-Cox 染色的化學(xué)性質(zhì)尚未完全了解;Golgi-Cox 浸漬的神經(jīng)細(xì)胞在堿化作用下形成的黑色沉積物被認(rèn)為是黑色硫化汞和一些金屬的復(fù)雜氧化物。

②用途

高爾基法能夠發(fā)現(xiàn)動(dòng)物大腦的神經(jīng)細(xì)胞因藥物處理或神經(jīng)系統(tǒng)疾病引起的樹(shù)突和樹(shù)突棘微小形態(tài)改變，觀察神經(jīng)發(fā)育，死亡，傳遞等方面區(qū)別。如阿爾茨海默病檢測(cè)腦組織神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)改變記憶學(xué)習(xí)記憶的影響。

尼氏染色法(Nissl staining):

優(yōu)點(diǎn):

操作簡(jiǎn)便，實(shí)驗(yàn)成本低;

不足:

中腦對(duì)神經(jīng)元進(jìn)行數(shù)量統(tǒng)計(jì)，觀察是否有神經(jīng)元丟失。不能觀察樹(shù)突或樹(shù)突棘的變化。

③材料與儀器

儀器:

3D 掃描儀掃描或正置顯微鏡(含拍照系統(tǒng))

材料:

動(dòng)物及死后人類(lèi)腦組織

4%(w/v) 多聚甲醛、異戊烷、干冰

丙烯基紫羅蘭溶液

50%/75%/95%/100% 乙醇、二甲苯封片劑、刀片、染色缸、低溫保持器凝膠涂層顯微鏡載玻片、吸管、濾紙

蓋玻片、FD 快速高爾基染色試劑盒

④步驟

本次實(shí)驗(yàn)步驟以?xún)?yōu)化的 Golgi-cox 技術(shù)為例:

1.提前24h將試劑盒中的溶液A和B混勻:

2.將小鼠腦組織取出后用干凈的PBS沖洗后，置于A和B的混合液中，在室溫下避光保存。浸泡6h以后或次日更換新的浸漬液，在室溫下避光保存2周(每個(gè)腦組織至少用2mL浸泡液):

⑤注意事項(xiàng)

1.本實(shí)驗(yàn)樣品使用新鮮或短期固定的腦組織。不推薦使用已經(jīng)進(jìn)行福爾馬林固定或新鮮冷凍的腦組織;

2.對(duì)于體積較大的腦部樣本(如大鼠腦組織)需用鋒利的刀片切成大約 10mm厚的塊狀;

3.溶液A和溶液B的混合液至少提前 24h配制且不能攪拌:

4.步驟2中，在腦組織浸泡期間每周兩次對(duì)裝有組織的容器可輕輕地左右旋渦(一定不要晃動(dòng)!)幾秒鐘:

5.溶液A和B含有重金屬,接觸皮膚是有毒的，如果吞咽可能是致命的。實(shí)驗(yàn)操作時(shí)，一定要穿戴防護(hù)服、手套等防護(hù)用具，在化學(xué)通風(fēng)櫥中完成。溶液A和B的廢棄物要專(zhuān)門(mén)收集起來(lái)，統(tǒng)一由專(zhuān)業(yè)部門(mén)處置;

6.用 Golgi 染色的切片應(yīng)避光保存

⑥常見(jiàn)問(wèn)題

1. 背景顏色深:

可能原因是溶液A和B沒(méi)有提前24h配置或腦組織在A和B混合液中浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，超過(guò) 14天。

2.出現(xiàn)陰性結(jié)果:

可能是因?yàn)閷?dòng)物進(jìn)行灌注后再取腦進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

3.高爾基染色不深:

可能原因腦組織在A和B混合液中染色時(shí)間完全不足14 天或是因?yàn)橐后w太少?zèng)]有完全浸潤(rùn)腦組織或是試劑過(guò)期。

文章出自：高爾基染色實(shí)驗(yàn)    想了解更多請(qǐng)關(guān)注：http://www.dogcareservices.net/